Alessandro Matri è nato il 19 agosto 1984 a Sant’Angelo Lodigiano, in provincia di Lodi. A 11 anni è entrato nel settore giovanile del Milan, dove è rimasto fino ai 20 anni, vincendo una Coppa Italia, una Coppa UEFA e una Supercoppa UEFA. Ha esordito in Serie A con la maglia rossonera il 24 maggio 2003. Nella stagione successiva ha giocato esclusivamente nella Primavera del Milan, per poi trasferirsi in prestito al Rimini in Serie B nel 2006, dove ha iniziato a imporsi.

Nel corso della carriera ha vestito le maglie di Cagliari, Juventus, Milan, Lazio, Fiorentina, Genoa, Sassuolo e Brescia, vincendo tre scudetti con la Juventus, due Supercoppe italiane, due Coppe Italia, una Champions League e una Supercoppa UEFA con il Milan. Ha totalizzato 127 gol in oltre 500 presenze tra le categorie professionistiche.

Ha annunciato il ritiro dal calcio giocato il 6 maggio 2020, per poi chiudere la carriera nel novembre 2022 con la maglia del Graffignana 2013, senza però scendere in campo. Dal 2021 è uno dei volti di DAZN e commentatore tecnico durante le partite. Dal 2009 è legato sentimentalmente a Federica Nargi, showgirl ed ex velina di Striscia la Notizia, conosciuta in una discoteca milanese: dalla coppia sono nate le figlie Sofia e Beatrice.